Person: Leone, Paola E.
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Manipulación genética en las células madre
La manipulación genética ha permitido desarrollar células madre embrionarias (hESCs) y células madre pluripotentes inducidas (hiPSCs), las cuales tienen el potencial de diferenciarse a cualquier tipo de tejido, constituyéndose en un recurso importante de investigación y de aplicación biomédica. Sin embargo, la investigación con hESCs supone dificultades éticas como la utilización de embriones humanos y el problema del rechazo de tejidos después del trasplante en pacientes. Con los avances en reprogramación de fibroblastos de ratón y humanos a hiPSCs mediante la expresión de ciertos factores de transcripción se cuenta con una nueva herramienta en el campo de la medicina regenerativa. Así, con la reprogramación de células somáticas adultas se evitarían problemas de rechazo al generar hiPSCs directamente de células propias del paciente a tratar. En Ecuador aún no contamos con este recurso, en infraestructura, equipamiento y personal, pero es importante considerarlo como una alternativa de tratamiento.
Datos de Ecuador en la Red Iberoamericana para la Investigación de Mieloma Múltiple
Introducción: el mieloma múltiple es un tumor de las células plasmáticas, se presenta más comúnmente en hombres que en mujeres y se ha informado de diferencias en la incidencia según el grupo étnico. Con respecto a las causas relacionadas al desarrollo de mieloma, se ha descrito que la exposición a diferentes agentes químicos podrían constituir factores de riesgo. Los estudios epidemiológicos y genéticos del mieloma en Latinoamérica son escasos, por lo que se conformó una red entre diferentes países de Iberoamérica. Material y métodos: en este estudio multicéntrico de Ecuador, se analizaron los pacientes diagnosticados de mieloma múltiple entre 1984 y 2013 a los que se realizó el estudio genético. Estos pacientes correspondieron al grupo étnico mestizo y fueron clasificados: I (8%), II (21%) y III (71%) según los estadios de Durie y Salmon. Resultados: la supervivencia global fue de 42,6 meses. El estudio citogenético mostró una frecuencia más alta de las alteraciones estructurales (68%) frente a las numéricas (32%). Conclusiones: La incidencia de mieloma en Ecuador es inferior a lo informado a nivel mundial. En relación al efecto de los genotóxicos con el desarrollo de mieloma se determinó que 14% de los casos tenían exposición a agentes químicos por su trabajo en agricultura. El análisis de historias clínicas evidenció insuficiente información, por lo que se recomienda mejorar la introducción de datos, porque repercutiría en el manejo adecuado de los pacientes. Es preciso introducir la realización de los estudios citogenéticos a partir de células plasmáticas seleccionadas.
Frecuencia y características de la deleción 6q en pacientes con mieloma múltiple
Introducción: El mieloma múltiple (MM) es una neoplasia post-centro germinal caracterizada por la presencia de múltiples anomalías cromosómicas primarias y secundarias que le confieren alta heterogeneidad genética y amplia variabilidad clínica. Entre las diferentes anomalías secundarias encontramos las alteraciones estructurales del cromosoma 6, particularmente la deleción parcial de su brazo largo (del6q). Esta anomalía presenta diferentes puntos de ruptura y ha sido detectada en 20-35% de los casos en diferentes series, no existiendo información respecto de pacientes con MM de Latinoamérica. Objetivos: Analizar la frecuencia, distribución y características de la del6q en pacientes con MM de diferentes países de Latinoamérica en el marco de un estudio colaborativo del GELAMM (Grupo de Estudio Latinoamericano de MM), que incluyó casos de Argentina, Chile, Ecuador y Uruguay. Material y métodos: Se incluyeron 220 pacientes con cariotipo anormal, de los cuales 55 (25%) presentaron del(6q) (28 varones; edad media: 62,3 años: rango: 36-80 años; R-ISS: 1: 27,5%, 2: 31,1%, 3: 41,4%). Se efectuó cultivo de médula ósea sin estimular, estudio citogenético con técnica de bandeo G y FISH (Fluorescence in situ hybridization) empleando el panel de sondas para MM. Para la comparación de las características clínicas se tomó como referencia un grupo de 105 pacientes con MM con cariotipo y FISH normal (CyFN) (57 varones; edad media: 57,6 años, rango: 34-88 años; R-ISS: 1: 10,6%, 2: 50%,3: 39,4%). El estudio fue evaluado y aprobado por los Comités de Ética locales. Todos los individuos prestaron su consentimiento informado. Resultados: El análisis citogenético de los pacientes con del6q mostró la presencia de cariotipo simple (CS) en el 52,7% de los casos y cariotipo complejo (CC) en el 47,3%. Los puntos de ruptura más frecuentes fueron 6q23 y 6q25 (32,7% cada uno), seguidos por 6q21 (29,1%), 6q13 (18,2%), 6q15 (16,4%), 6q27 (10,9%), 6q12 (3,6%) y 6q16, 6q22 y 6q24 (1,8% cada uno). Las alteraciones citogenéticas más frecuentemente asociadas a la del6q correspondieron a los cromosomas: 1 (38,2% de los casos; tanto ganancia/amplificación de 1q21 como deleción de 1p32), 13 (32,7%) (particularmente monosomía), 11 (30,9%), 3 (27,3%), 14, 15 y 19 (25,5% cada uno). Se detectaron 3 pacientes con la t(11;14) y 3 con pérdida del cromosoma 14 (5,4% cada uno). El análisis por FISH confirmó la asociación de del6q con alteraciones del cromosoma 1. Los pacientes con CC mostraron alta frecuencia de del17p13 (67%). Se observaron las translocaciones t(4;14) (23,1%) y t(14;16) (15,4%). En cuanto a los parámetros clínicos, no se encontraron diferencias en la edad media de los pacientes con CS (62,7 años) y CC (61,4 años) pero ambos mostraron diferencias significativas respecto de los casos con CyFN (57,6 años) (p=0,0216). Los pacientes con del6q presentaron incremento de los niveles de LDH (p<0,0001), en tanto que aquellos con CC mostraron aumento de creatinina (p=0,0276) respecto de los casos con CyFN (p=0,0276). Asimismo, encontramos una marcada diferencia en la evolución clínica de los pacientes, con similar sobrevida (SV) en los casos con CS (82,2 mes) y CyFN (78,2 meses), a diferencia de los pacientes con CC que mostraron una significativamente corta SV (36,1 meses) (p=0,003). Conclusiones: Nuestra cohorte muestra una frecuencia de del6q similar a la detectada en las series publicadas, con particular implicancia de los puntos de ruptura 6q23 y 6q25, este último específicamente relacionado a una variante con impacto adverso en el curso clínico de los pacientes. Simultáneamente, nuestros datos presentan alta frecuencia de CC, asociado a mala evolución clínica y corta SV, así como una alta proporción de alteraciones estructurales del cromosoma 1, sustentando la importancia de los estudios citogenéticos y citomoleculares en la caracterización biológica del MM, y contribuyendo a un mejor diagnóstico y/o pronóstico de los pacientes.
Frequency and characteristics of del(6q) in patients with multiple myeloma from latin-american countries. A real-world study página de artículo simple
Background: Multiple myeloma (MM) is a clonal B cell malignancy characterized by the presence of multiple structural and numerical genetic alterations, including gains, losses and rearrangements of different chromosomal regions. Among them, the partial deletion of the long arm of chromosome 6 [del(6q)] is a common recurrent abnormality in MM, observed in 20-35% of patients. Despite this, there is no data about this alteration from MM patients in Latin America (LA). Aims: To evaluate frequency, distribution and clinical characteristics of MM patients with del(6q) in a multicenter study from the GELAMM (Grupo de Estudio Latinoamericano de MM). Methods: We retrospectively reviewed MM patients from Argentina, Chile, Ecuador and Uruguay, whose specimens were assessed by conventional cytogenetics and tested using interphase FISH between 2010 and 2020. Conventional cytogenetic analysis was performed on unstimulated bone marrow (BM) cells cultured. G-banded technique was used. FISH analysis was performed on unstimulated BM samples or on isolated plasma cells. The MM DNA probe panel was used. To compare clinical characteristics, a reference group of 105 MM patients without cytogenetic and FISH alterations (w/alt) (57 males; R-ISS: 1: 10.6%, 2: 50.3%, 3: 39.4%) was included. The study was approved by the local Ethics Committees of each Institution, in compliance with the Declaration of Helsinki. Results: A total of 220 patients with abnormal karyotypes were detected; 55 (25%) of them showed del(6q) (28 males; R-ISS: 1: 27.5%, 2: 31.1%, 3: 41.4%). Cytogenetic analysis showed simple karyotypes (SK; one or two alterations) in 51% of cases and complex karyotypes (CK; 3 or more alterations) in 49%. The distribution of modal number was: hypodiploid (33% of cases), hyperdiploid (30%), hypertriploid (11%), hyperhaploid (8%), pseudodiploid (7%), hypotriploid (7%) and hypotetraploid (4%). The most frequent breakpoints were 6q23 and 6q25 (32.7% each), followed by: 6q21 (29.1%), 6q13 (18.2%), 6q15 (16.4%) and 6q27 (10.9%). Most common alterations associated to del(6q) involved chromosomes: 1 (38.7% of cases), 13 (32.7%), 11 (30.9%), 3 (27.3%), 14, 15 and 19 (25.5% each). By FISH analysis, patients with CK showed high frequency of del(17p) (63.5%) and chromosome 1 alterations (61.5%). Translocations t(11;14) and t(4;14) were observed in 15% of cases each and t(14;16) in 10% of patients. Cases with del(6q) were older (61.4 years) than those w/alt (57.6 years) (p=0.0216). Analysis of clinical parameters showed increased lactate dehydrogenase and serum monoclonal M protein levels in patients with del(6q) than those w/alt (p<0.0001 and p=0.0353, respectively). Cases with CK also had higher creatinine levels (p=0.0276). Seventy percent of patients received proteasome inhibitor and immunomodulatory agents at induction. No differences in overall survival (OS) between patients with SK (82.2 months) compared to those w/alt (78.2 months) was seen, but a significant short OS in cases with del(6q) and CK (36.1 months) (p=0.003) was observed. Summary/Conclusion: To our knowledge, this is the first analysis of del(6q) in MM patients from LA. Our cohort had a similar frequency of del(6q) than published series, with particular involvement of 6q23 and 6q25 breakpoints. Interestingly, patients with del(6q) showed high frequency of chromosome 1 alterations, particularly in the context of CK, associated to poor clinical outcome. Our study reinforces the importance of conventional metaphase karyotyping, and its contribution to a better stratification and biologic characterization of MM patients.
Cytogenetic and Molecular Characterization of Hematological Neoplasm in an Ecuadorian population
Cancer is one of the major causes of mortality in Ecuador and annually, hematological malignancies are within the top ten most common cancers. In this multicentric study, we analyzed a series of patients diagnosed with different hematological disorders between the years 1984 and 2012. Chromosome abnormalities were detected in 1886 (45.9%) patients. FISH and RT-PCR techniques were used in order to determine the presence of genetic rearrangements and complement conventional cytogenetics results. Using FISH and RT-PCR, positive cases were increased by 1.8% and 6.9% respec- tively. We analyzed fusion genes resulting from t(8;21), t(15;17), inv(16), t(9;22), 11q23 rearrangements, t(4;11) and t(1;19). The frequency of transcripts of some of these fusion genes was of particular interest as our results differ from studies on other populations. Specifically, the fusion gene BCR-ABL was present in the form of the b2/a2 transcript in 95% of CML patients and in the form of b3/a2 transcript in the remaining 5%. The PML-RARA fusion gene also showed a distinct pattern of transcript expression. This fusion gene exhibited the bcr2 (36%) and bcr3 (64%) transcripts, how- ever the bcr1 transcript was absent from our sample population. All cases carrying the CBFB-MYH11 fusion gene ex- hibited the F transcript. This was also of interest due to the rarity of this particular transcript worldwide. Finally all cases carrying the MLL-AF4 fusion gene displayed the e7-e8 transcript. The frequency of the subtypes of some fusion genes differ from those reported in other populations, possibly due to the particular genetic make-up of the Ecuadorian population, mostly mestizo, as well as environmental factors.
Análisis citogenético molecular de individuos con trastornos del desarrollo sexual: Priorización de genes
Existen algunos casos de nacimientos con trastornos del desarrollo sexual que requieren de un equipo multidisciplinario para orientar de una manera apropiada tanto el diagnóstico como el tratamiento de estas alteraciones. Según los datos del INEC 2014, en el Ecuador se han registrado 2.232 casos de egresos hospitalarios por causas como: malformaciones congénitas de ovarios, de útero, de órganos genitales masculinos y femeninos, hipospadias, sexo indeterminado y pseudohermafroditismo, entre otras. El objetivo de este trabajo es complementar los métodos de diagnóstico de estas alteraciones. El estudio citogenético se realizó según la técnica estandarizada que consiste en cultivo de sangre periférica por 72 horas con la posterior cosecha y análisis cromosómico. La técnica molecular consistió de una PCR para análisis del gen SRY y la priorización de genes se realizó en la Disgenesis Gonadal específicamente, para lo cual se utilizó algunos programas estadísticos como MetaRanker o DisGeNET. Del total de cariotipos realizados en casos con trastornos del desarrollo se observó que el 71% corresponden a Síndrome de Turner, seguido del Síndrome de Klinefelter con 6% y genitales ambiguos con 3,3%. El resto de alteraciones se presentó en menores porcentajes. Todos los casos analizados para el gen SRY confirmaron el resultado de citogenética convencional. El análisis preliminar de priorización de genes para la disgenesia gonadal mostró que genes como SRY, WT1, SHOX, SOX9, AMH, AR, entre otros, tienen un papel importante dentro del estudio de este tipo de malformación. Este tipo de análisis que incluye técnicas citogenéticas convencionales que se complementan con técnicas moleculares y bioinformáticas se convierte en un buen complemento para el diagnóstico y manejo de este tipo de alteraciones.
Mieloma múltiple en América
La obra presenta los datos de Argentina, Bolivia, Colombia, Chile, Ecuador, El Salvador, Honduras, México, Perú, Uruguay y Venezuela; una revisión de otros países (Brasil, Costa Rica, Cuba, Guatemala, Haití, Nicaragua, Panamá, Paraguay y República Dominicana) y un capítulo de cuidados paliativos de Estados Unidos.